La proteína SbmA de Escherichia coli: interacción con una región del antibiótico microsina J25 y fenotipo de mutantes dobles sbmA tolC
Capítulo 1: La microcina J25 (MccJ25) es un antibiótico peptídico de 21 aminoácidos producido por Escherichia coli. La RNA polimerasa (RNAP) de E. coli es el blanco de acción específico de MccJ25. La MccJ25 entra en las células mediante dos transportadores: FhuA en la membrana externa y SbmA en la m...
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Detalles Bibliográficos
- Autor principal:
- Formato:
- Tesis Libro
- Lenguaje:
- español
- Publicado:
-
Tucumán
Universidad Nacional, Facultad de Ciencias Naturales e Instituto Miguel Lillo
2008
- Colección:
- Tesis: Doctor en Ciencias Biológicas
Director: Dr. Raúl Armando Salomón
Referencias: h. 83-95
Nº orden interno: TDCs.Biol. 028 - Materias:
- Etiquetas:
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| Sumario: | Capítulo 1: La microcina J25 (MccJ25) es un antibiótico peptídico de 21 aminoácidos producido por Escherichia coli. La RNA polimerasa (RNAP) de E. coli es el blanco de acción específico de MccJ25. La MccJ25 entra en las células mediante dos transportadores: FhuA en la membrana externa y SbmA en la membrana interna. Empleando mutagénesis dirigida sustituímos el residuo de His5 del péptido por Lys, Arg, y Ala, y determinamos los efectos de las sustituciones sobre el crecimiento celular y la actividad de la RNAP in vitro. Los resultados muestran que todas las microcinas mutantes inhiben a la RNAP de E.coli. Sin embargo, no efectan el crecimiento celular. Experimentos en los que las células fueron tratadas para permitir la entrada de la MccJ25 sin intervención de FhuA dmostraron que las sustituciones de His5 afectan su interacción con SbmA. Por lo tanto, concluímos que este residuo es importante para la interacción con AbmA, y no influye en la actividad antibiótica sobre la RNAP.CAPITULO II. Este Capítulo consta de tres secciones. En la primera sección demostramos que la proteína de membrana externa TolC es requerida para la resistencia de alto nivel (>40 µg/ml) a tetraciclina provista por las bombas Tet(A) codificadas por plásmidos y por el transposón Tn10. Nuestros resultados apoyan la conclusión de que las mutaciones tolC actúan a través de la inactivación del sistema de eflujo AcrAB, y proponemos que el alto nivel de resistencia a tratraciclina conferido por Tet(A) resulta de su cooperación con AcrAB, el cual capturaría tetraciclina del periplasma, donde ha sido acumulada por la acción de Tet(A), y luego expulsaría la droga directamente al medio extracelular. En la segunda sección. demostramos que la adición de una mutación sbmA a una mutante tolC exacerba el fenotipo de sensibilidad a tetraciclina de las mutantes tolC: la doble mutante no forma colonias, aún en presencia de una concentración del antibiótico tan baja como 5 µg/ml. Esto indicaría que hay un efecto aditivo de las mutaciones, resultando en una supresión casi completa de la expresión fenotípica de la resistencia a tetraciclina del Tn10. Para explicar este efecto postulamos diversas hipótesis. Finalmente, presentamos resultados que demuestran la existencia de un factor difusible excretado por E.coli K-12 que revierte esta sensibilidad a tetraciclina de la doble mutante. En la tercera y última sección describimos un nuevo fenotipo de las mutantes dobles sbmA-tolC: la caída de viabilidad de las células en fase estacionaria al cuarto o quinto día después de haber entrado en dicha fase. De manera análoga a la hipersensibilidad tetraciclina, esta pérdida de viabilidad es también subsanada, parcialmente al menos, por un factor difusible presente en el sobrenadante de cultivos de cepas de E.coli. |
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| Descripción Física: | 95 h. il.,fig.alg.color.,1CDRom (texto completo 29,5 cm. |