Desarrollo de sistemas de transferencia genética en Zimomonas mobilis A1. Clonado de genes de interés industrial
de G+C: 47,5-49,5) y dos subespecies Zymomonas mobilis subsp. mobilis: cepa tipo ATCC 10988 y Zymomonas mobilis subsp. pomacii: cepa tipo 29192. La prueba fenotípica más sencilla para diferenciar las subespecies es el crecimiento a 36ºC (Swings y De Ley, 1977), siendo positivo en el caso de la subes...
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Detalles Bibliográficos
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- Formato:
- Tesis Libro
- Lenguaje:
- español
- Publicado:
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Tucumán
Universidad Nacional de Tucumán, Fac. de Cs. Naturales e I.M.L.
1999
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| Sumario: | de G+C: 47,5-49,5) y dos subespecies Zymomonas mobilis subsp. mobilis: cepa tipo ATCC 10988 y Zymomonas mobilis subsp. pomacii: cepa tipo 29192. La prueba fenotípica más sencilla para diferenciar las subespecies es el crecimiento a 36ºC (Swings y De Ley, 1977), siendo positivo en el caso de la subespecie mobilis y negativo en el caso de la subespecie pomacii.- Todas las cepas aisladas tienen la habilidad de metabolizar un muy reducido grupo de azúcares: glucosa, fructuosa y sacarosa. El metabolismo de estos azúcares se realiza a través de la vía de entner-Doudoroff, siendo los productos finales etanol y dióxido de carbono.- Se han realizado extensivos estudios morfológicos y fisiológicos de Zymomonas (Swings y De Ley, 1977; Viikari 1984 a, 1984b; Doelle 1982a, 1982b; Abate y col., 1989). En contraste es muy poco lo que se conoce acerca de su genética. El análisis genético de Zymomonas se ha visto limitado por la baja eficiencia de los métodos de transferencia de genes (Buchholz y Eveleigh, 1986; Montenecourt, 1985; Skotnicki y col., 1984; Swings y De Ley, 1977). Skotnicki y col. (1980) fueron los primeros en mostrar la posibilidad de transferir plásmidos a Zymomonas mediante conjugación interespecífica. Este sistema fue también utilizado por Carey y col. (1983b) al transferir y expresar en Zymomonas un transposón (Tn951) portador del operón lac. La transformación de Zymomonas fue demostrada por Browne y col. (1984) mediante la utilización de plásmidos híbridos capaces de replicar en Zymomonas y en Escherichia coli, sin embargo son numerosos los obstáculos cuando se utilizan estos plásmidos como vectores de clonado para Zymomonas. entre las dificultades, la más importante deriva del gran tamaño de los mismos (28 kb), lo que reduce la eficiencia de transformación y aumenta la inestabilidad en el interior del huésped (Afendra y drainas, 1987).- Diversos autores han determinado la existencia de plásmidos en cepas de Zymomonas. Estos plásmidos no han sido todavía caracterizados, aunque representan una excelente fuente de ADN para el desarrollo de vectores de clonado (Dally y col., 1982; Drainas y col., 1983).- En este trabajo, utilizamos un plásmido aislado de Z. mobilis PROIMI (A1) de aproximadamente 6 kb, denominado pZMP1 para la construcción de un vector de clonado integrativo (Delgado y col., 1995).- Se realizó también la construcción de un vector de expresión para Z. mobilis en el que se clonaron las regiones reguladoras del gen adhB de Z. mobilis, aislado por PCR a partir de la secuencia reportada. Se reemplazó la región codificante del gen de la enzima por la región codificante de una proteína fluorescente utilizando la técnica "Splicing by overlap extension" Por medio de la recombinación con secuencias homólogas en el ADN cromosomal de la bacteria se logró la integración de la construcción, que resultó estable y también se lograron elevados niveles de expresión del gen heterólogo.- |
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| Descripción Física: | 102 h. il., fig., tabl. ; 29 cm. |